METODOS DE ESTUDIO Y CONTROL DE MICROORGANISMOS

METODOS DE ESTUDIO Y CONTROL DE MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS:
• Protozoos
• Algas
• Hongos
• Bacterias
• Virus
TIPOS DE MICROSCOPIOS
MICROSCOPIO ÓPTICO
 Microscopio de campo claro
 Microscopio de campo oscuro
 Microscopio de contraste de fases
 Microscopio de fluorescencia
 Microscopio de laser con focal
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
 De barrido : haz de electrones que barre la superficie de un objeto sólido (SEM), resolución 7nm
 De transmisión: haz de electrones que atraviesa cortes ultra finos de una muestra (TEM), resolución 5A°
MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA (MFA)
TIPOS DE TINCIONES
 TINCIÓN SIMPLE
Gram+: peptidoglucano, membrana plasmática.
Gram-: peptidoglucano, membrana plasmática, espacio periplásmico, lipopolisacárido y proteína.
 TINCIÓN DIFERENCIAL
Tinción de gram/ tinción de ziehl-neelsen
 TINCIONES ESPECÍFICAS
*tinción de cápsulas, tinción de flagelos y tinción de esporas.

MÉTODOS DE AISLAMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS
MÉTODOS DE AISLAMIENTO DE CULTIVOS PUROS
 Siembra por estría en placa petri
 Vertido en placa
 Extensión en placa
-Diluciones seriadas
-Asa de Digralsky
MEDIOS DE CULTIVOS
 Medios definidos
-Glucosa…………. 10 g
-(NH4)2SO4…………. 2 g
-CaCl2 ……….......0,01 g
-FeSO4.7H2O…..0,005 g
-MgSO4.7H2O…..0,02 g
-Agua destilada…… 1 L
-Agar……………… 15 g

 Medios complejos: caldo nutritivo
-Peptona…………… 5 g
-Extracto de carne.. 3 g
-NaCl…………………8 g
-Agua destilada…….1 L

 Medios selectivos y diferenciales
-Agar entérico de hektoen (enterobacterias patógenas)
-Agar Baird-Parker (estafilococos).
-Agar levine (EMB)
-Agar Wilson-Blair (salmonella)

 Medios de enriquecimiento
-Caldo Giolitti-Cantoni (estafilococos)
-Caldo Müller-Kauffmann (salmonella)




CRECIMIENTO Y CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS
NUTRICIÓN MICROBIANA:

REQUERIMIENTOS NUTRITIVOS

 Fuente de carbono:
-CO2: Autótrofos
-Compuestos orgánicos: heterótrofos
-Fuente de energía: generación de ATP y poder reductor
-Luz: fototrofos
-Compuestos químicos: quimiotrofos
-compuestos orgánicos: quimioorganotrofos
-compuestos inorgánicos: quimiolitotrofos

TIPOS NUTRICIONALES DE LOS MICROORGANISMOS
-Fotoautótrofos
-Fotoheterótrofos
-Quimiolitotrofos autótrofos
-Quimiolitotrofos heterótrofos: mixotrofos
-Quimioorganotrofos heterótrofos (quimioheterótrofos)

CADENA METABÓLICA
-Entrada de nutrientes
-Reacciones catabólicas
-Biosíntesis
-Polimerización
-Ensamblaje

FUENTE DE NITROGENO
• Inorgánica:
- NH4+
- NO3-
- N2
• Compuestos orgánicos nitrogenados
-aminoácidos
- bases nitrogenadas


CRECIMIENTO CELULAR Y DE POBLACIONES

DIVISIÓN CELULAR EN PROCARIOTAS:

• FISIÓN BINARIA: el tiempo para completar el ciclo depende de factores nutricionales y genéticos.

-contraste de fases
-tinción de nucleoide
-tinción del anillo ftsz
-tinción de nucleoide y anillo.

CRECIMIENTO DE POBLACIONES
-velocidad de crecimiento
-tiempo de generación
-expresión del crecimiento


EFECTO DE FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO

• TEMPERATURA
-mínima
-máxima
-óptima

• TIPOS DE MICROORGANISMOS SEGÚN SU TEMPERATURA ÓPTIMA
*Psicrófilos: 4°: polaromonas vacuolata
*Mesófilos: 39°: escherichia coli
*Termófilos: 60°: bacillus stearothermophilus
*Hipertermófilos: 88°: thermococcus celer
*Hipertermófilos: 106°: pyrolobus fumarii

• SALINIDAD
-HALÓFILOS: discretos (1-6%) y moderados (6-15%) de NaCl
-HOLOTOLERANTE: crecen en amplio rango de actividad de agua.
-HLÓFILOS EXTREMOS: 17-36% NaCl

TIPOS DE MICROORGANISMOS EN RELACIÓN CON EL OXIGENO
• AEROBIOS
• ANAEROBIOS
• FACULTATIVOS
• MICROAERÓFILOS
• ANAEROBIOS AEROTOLERANTES

MÉTODOS DE CONTROL MICROBIANO: TERMINOLOGÍA
• ESTERILIZACIÓN: destrucción total de formas vivas en material inerte

• DESINFECCIÓN: destrucción de agentes infecciosos en estado vegetativo en material inerte = desinfectantes

• ANTISEPSIA: destrucción de agentes infecciosos en estado vegetativo en la superficie de tejidos vivos = antisépticos

• SANEAMIENTO: reducción microbiana en material inerte o tejidos vivos hasta niveles seguros = limpieza mecánica de productos

• QUIMIOTERAPIA: control crecimiento microbiano dentro de un hospedador = agentes quimioterapéuticos antimicrobianos.


CONTROL DE CRECIMIENTO MICROBIANO

MÉTODOS FISICOS

ESTERILIZACIÓN POR CALOR

• CALOR SECO
-flameado (incineración)
-horno pasteur 170°C/ 1-2h

• CALOR HUMEDO
-hervido 100°C
-tindalización 100°C
-vapor de agua a presión: 121°C/20mn
-esterilización a temperatura ultraelevada (UHT) 4°C=1s, 140°C=3s.
-pasteurización: reducción de población bacteriana y alargamiento de vida útil 71-72° =15s

ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN

• FILTRACIÓN DE SOLUCIONES TERMO SENSIBLES
• FILTRACIÓN DEL AIRE:
-algodones en los tubos de vidrio, mascarillas
-Filtro de alta eficacia de retención de partículas (HEPA)
-Cabinas de seguridad biológica de flujo laminar
- Habitaciones especiales de hospitales


ESTERILIZACIÓN POR RADIACIÓN: Depende de la energía, intensidad y duración.

• IONIZANTES:
-rayos y: suministros quirúrgicos, materiales de laboratorio, industrias de alimentos y productos cárnicos.
-rayos de electrones
-rayos x

• NO IONIZANTES
-luz UV: desinfección de superficies y aire.
-microondas

OTROS MÉTODOS

• CONTROL POR BAJAS TEMPERATURAS
-congelación
-refrigeración (0-4°C)
• DESECACIÓN
-evaporación (industria alimentaria)
-liofilización (conservar cultivos)
-soluciones hipertónicas: salazón, miel, mermeladas.

MÉTODOS QUÍMICOS

• ANTISÉPTICOS
• DESINFECTANTES
• ESTERILIZANTES

Propiedades
*Inocuo para las personas y no corrosivo para materiales
* Amplio espectro
* Eficaz a diluciones altas y en presencia de materia orgánica
* Soluble en agua
* Estable, inodoro y económico

ANTISÉPTICOS

• Alcohol (60-85% etanol) piel
• Fenoles (hexaclorofeno, triclosan, clorhexidina): Jabones, lociones, cosméticos y desodorantes
• Detergentes catiónicos (cloruro de benzalconio) Jabones y lociones
• Peróxido de hidrógeno al 3% Piel
• Compuestos de yodo (Betadine) Piel
• Nitrato de Plata Ojos neonatos


DESINFECTANTES Y ESTERILIZANTES

• ALCOHOL 60-85% etanol: para instrumentales médicos.

• GAS CLORO: para suministros de agua

• COMPUESTOS COLORADOS: equipos de industria alimentaria

• DETERGENTES CATIÓNICOS (amonio cuaternario): para instrumental médico, alimentos y equipos de industrias lácteas.

• FORMALDEHÍDO (3-8%): superficies

• SULFATO DE COBRE: algicida

• GAS: esterilizante de material termosensible.



AGENTES MICROBIANOS: antibióticos y quimioterapéuticos de síntesis
• Penicilina
• Sulfanilamida

TIPOS DE AGENTES ANTIMICROBIANOS
• Bacteriostático
• Bactericida
• Bacteriolítico

ANTIBIOTICOS
* Microorganismos productores
• BACTERIAS
-actinomicetos 4600
-bacillus 950
• HONGOS 1600
• PLANTAS
• ANIMALES

PROBLEMAS ACTUALES EN TERAPIA

• AUMENTO DE RESISTENCIAS
-abuso y mal uso de los antibióticos
-enfermedades crónicas
• SOLUCIONES
-uso restringido de los antibióticos
-búsqueda de nuevos antimicrobianos y mejora de los ya existentes.